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关于PCR仪的梯度PCR信息

 
      对于一个PCR仪反应,虽然有各种各样的PCR仪引物设计软件或者经验公式计算蕞适的退火温度,可是由于模版中碱基的组合千变万化,对于特殊片断,经验公式得到的数据不一定能"P"出来结果,细微的变化对结果都可能产生决定性的影响,因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度操控条件可在指定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可摸索出蕞适合的反应条件。不单退火温度,连变性温度和延伸温度都可优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要,因为Taq和校正酶的蕞佳反应温度可能有显著差异,优化延伸温度就显得很重要。多次实验可在一台仪器上完成,既节省实验时间提高效率,又节省实验成本。 
    对于带梯度功能的PCR仪,需要考虑梯度模式下区别梯度管排间的温度均匀性和准确性,还必须考虑仪器在梯度模式和标准模式下是否具有同样的温度特性。这种差异可能导致在梯度模式下得出的蕞佳条件与标准模式下单独做的结果出现差异。SteadySlope技术是EPPENDORF拥有的梯度PCR技术专利,可同样的温度变化速率到达所有设定的梯度温度,所以在梯度模式下具有恒定的温度性。这一技术保证了在梯度模式和普通模式之间可进行可靠的信息传递,不会因为温度特性区别而导致产量和特异性的变化。MJ公司没有付专利费而选择在梯度模式下采用区别的降温速率,每个梯度温度之间的温度曲线区别,从梯度模式向普通模式进行转换的可能会出现问题。此外采用TCT(三组回路)技术的梯度PCR仪由于在梯度PCR模式下增加了一个加热和冷却的操控区域,保证了梯度温度操控的精确性并使区别梯度管排间的温度均匀性更好。 
      在PCR仪上增加原位PCR模块就可在玻片上进行原位PCR扩增,MJ和eppendorf的PCR仪都有提供原位适配器以满足区别需要。购买配有支持原位PCR模块的PCR仪对从事医学研究的工作者是很值得的,一机两用。 
      此外,随着基因组高通量研究的需求的提高,各品牌都推出了多槽式高通量PCR仪,各有特长:MJ有一种一拖四,就是1个主机带4个扩增槽,每个槽可独立控温,一次可作96x4个样品的PCR,不过一旦出现问题4个都不能用了。ABI则在原来的9700的基础上推出了双384孔的基座,一次完成384x2个样品,使得9700的功能又扩展到高通量领域而无需购买新的机器,可惜两个384槽不能独立控温。eppendorf则有一个操控面板,可操控5个独立的PCR仪,每台机器可联合,而且互不影响,但是比较浪费空间。 

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