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DNA合成仪使用方法操作步骤

 
      以亚磷酰胺寡核苷酸混合为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA混合的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:
1)仔细检测DNA混合仪上所有试剂瓶中的试剂量,必要时换掉试剂瓶,特别注意乙腈的量,因为该溶剂用量较大。
2)将标记好的清洁的收集瓶装在DNA混合仪上。
3)将要混合的DNA序列输入混合仪。
4)检测选择的混合步骤是否正确。
5)选择结束方法:TritylOffAuto是DNA混合仪的原始状态,若打算以5,—DMT基团连接纯化寡核苷酸,将其转变为TritylOnAuto结束状态。
6)选择结束方法,一般为系统的原始状态。
7)在每个柱监视器的Username下,输入你所希望的保存名字。
8)以代码代替相应的DNA序列标记每一个收集瓶。
9)打印出每一个柱设置的详细资料。
10)检测打印出来的资料是否正确。
11)运行StartColumn步骤检测每一个柱的位置,确保混合仪上混合柱处于正确的位置。
12)检测连接在DNA混合仪上的溶剂残留(废液瓶)是否充满。
13)如果分部收集器用来收集每个DMT脱保护步骤的流出物,确保试管充分清洁干净,并打开分部收集器,确保DMT废液管路通向分部收集器。
14)启动循环,运行开始程序清洗试剂管路,除去原来的试剂。
注意:TritylOnAuto表示在混合寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT,并将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOffAuto表示在混合寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,将其从固相载体上切下来,储存在收集瓶中;TritylOnManual表示混合寡核苷酸的5’端核苷酸带有一个DMT,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在混合柱中;TritylOffManual表示在混合寡核苷酸的5,端核苷酸没有保护基团,寡核苷酸没有从固相载体上切下来,而是保留在混合柱中。

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