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定量PCR仪技术中Ct值的定义

  实时荧光定量PCR仪技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,未尾通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
  1.Ct值的定义
  在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle,t代表threshold(阈值,临界值),Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数。
  2.荧光阈值的设定
PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光阈值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,即:threshold = 10 ′ SDcycle 3-15
  3. Ct值与起始模板的关系
  研究表明,每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多,Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代Ct值。因此,只要获得未知样品的Ct值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。




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