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DNA测序仪试剂器材

    DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今 dna序列分析的主流。美国pe abi公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等dna测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最多的一种型号。
  1.bigdye测序反应试剂盒 主要试剂是bigdye mix,内含pe专利四色荧光标记的ddntp和普通dntp,amplitaq dna polymerase fs,反应缓冲液等。
  2.pgem-3zf (+) 双链dna对照模板 0.2g/l,试剂盒配套试剂。
  3.m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt,3.2μmol/l,即3.2pmol/μl,试剂盒配套试剂。
  4.dna测序模板 可以是pcr产物、单链dna和质粒dna等。模板浓度应调整在pcr反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒dna,浓度为0.2g/l,即200ng/μl。
  5.引物 需根据所要测定的dna片段设计正向或反向引物,配制成3.2μmol/l,即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物,如m13(-21)引物,t7引物等。
  6.灭菌去离子水或三蒸水。
  7.0.2ml或和0.5ml的pcr管 盖体分离,pe公司产品。
  8.3mol/l 醋酸钠(ph5.2) 称取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸馏水中,冰醋酸调ph至5.2,定容至100ml,高压灭菌后分装。
  9.70%乙醇和无水乙醇。
  10.naac/乙醇混合液 取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混匀,室温可保存1年。
  11.pop 6测序胶 abi产品。
  12.模板抑制试剂(tsr) abi产品。
  13.10×电泳缓冲液 abi产品。
  14.abi prism 310型全自动dna测序仪。
  15.2400型或9600型pcr仪。
  16.台式冷冻高速离心机。
  17.台式高速离心机或袖珍离心机。

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