DNA序列测定分手工测序和自动测序，手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今 dna序列分析的主流。美国pe abi公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等dna测序仪，其中310型是临床检测实验室中使用*多的一种型号。 1．bigdye测序反应试剂盒 主要试剂是bigdye mix，内含pe**四色荧光标记的ddntp和普通dntp，amplitaq dna polymerase fs，反应缓冲液等。
2．pgem-3zf (+) 双链dna对照模板 0.2g/l，试剂盒配套试剂。
3．m13(-21)引物 tgtaaaacgacggccagt，3.2μmol/l，即3.2pmol/μl，试剂盒配套试剂。
4．dna测序模板 可以是pcr产物、单链dna和质粒dna等。模板浓度应调整在pcr反应时取量1μl为宜。本实验测定的质粒dna，浓度为0.2g/l，即200ng/μl。
5．引物 需根据所要测定的dn**段设计正向或反向引物，配制成3.2μmol/l，即3.2pmol/μl。如重组质粒中含通用引物序列也可用通用引物，如m13(-21)引物，t7引物等。
6．**去离子水或三蒸水。
7．0.2ml或和0.5ml的pcr管 盖体分离，pe公司产品。
8．3mol/l 醋酸钠(ph5.2) 称取40.8g naac·3h2o溶于70ml蒸馏水中，冰醋酸调ph至5.2，定容至100ml，高压**后分装。
9．70%乙醇和无水乙醇。
10．naac/乙醇混合液 取37.5ml无水乙醇和2.5ml 3mol/l naac混匀，室温可保存1年。
11．pop 6测序胶 abi产品。
12．模板抑制试剂(tsr) abi产品。
13．10×电泳缓冲液 abi产品。
14．abi prism 310型全自动dna测序仪。
15．2400型或9600型pcr仪。
16．台式冷冻高速离心机。
17．台式高速离心机或袖珍离心机。
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