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液相色谱仪工作原理

 
      液相色谱仪系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检查器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样本溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检查器时,样本浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检查系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。

进样系统
液相色谱仪一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样本的重复性是有益的。

输液系统
该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47~4.4X10Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样本在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样本、保持样本的生物活性等都是有利的。流动相贮存器和梯度仪,可使流动相随固定相和样本的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离。

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