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PCR扩增仪操作过程
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PCR扩增仪操作过程
PCR用于扩增一小段已知的DNA片断,可能是单个基因,或者仅仅是某个基因的一部分。与活体生物不同的是,PCR只能复制很短的DNA片断,通常不超过10kbp。DNA是双链分子,因此用互补DNA双链的构造单位(核苷酸)来度量其大小,单位为碱基对(base pair, bp)。某些特定的方法可以扩增40kbp左右的片断,但是这种大小与真核细胞的染色体DNA相比仍然是很少的。例如,人的体细胞DNA含有大约30亿个碱基对。 目前应用的PCR反应需要几个基本组成: DNA模板(template),含有需要扩增的DNA片断。 2个引物(primer),决定了需要扩增的起始和终止位置。(见下面引物一节) DNA聚合酶(polymerase),复制需要扩增的区域。 脱氧单核苷酸(dNTP),用于构造新的互补链。 缓冲体系,提供适合聚合酶行使功能的化学环境。 PCR反应在热循环设备中进行。PCR仪可以将反应管加热或冷却到每步反应所需的**的温度。为防止反应体系中液体产生蒸气,通常在反应管上加盖加热的盖子(比加热板温度来的高),或者在反应体系表面加入一层石蜡油。
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